sirna轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟（以 24 孔板為例）

1． 接種細(xì)胞

對(duì)于貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，將細(xì)胞按照每孔1-2x10^5個(gè)細(xì)胞的量進(jìn)行鋪板，使其在轉(zhuǎn)染時(shí)密度為60%-80% 為佳。

對(duì)于懸浮細(xì)胞：轉(zhuǎn)染當(dāng)天，配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物之前，用PBS清洗細(xì)胞1-2次，用250 μL Opti-MEM I 減血清培養(yǎng)基 (無血清) 重懸細(xì)胞，在24孔板中進(jìn)行細(xì)胞鋪板，細(xì)胞密度為60-80%。

2． 準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染試劑-siRNA復(fù)合物（或轉(zhuǎn)染試劑-miRNA復(fù)合物）

(1) 對(duì)于每孔細(xì)胞，取2 μLsiRNA (20 μM，DEPC水溶解)加入到1.5mL離心管中，加入2 μL轉(zhuǎn)染試劑與siRNA 混合，室溫孵育3 min。

(2) 往上述混合物中加入100 μL Opti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清)，輕輕混勻，在室溫下靜置30 min，形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物。

(3) 30 min后，往上述復(fù)合物中加入250 μLOpti-MEM I減血清培養(yǎng)基(無血清)，輕輕混勻。

3． 轉(zhuǎn)染細(xì)胞

(1) 細(xì)胞用PBS清洗1-2次，將上述350µL轉(zhuǎn)染試劑-siRNA復(fù)合物加入每孔細(xì)胞。

(2) 在 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24-48 h，無需更換新的培養(yǎng)液，之后即可檢測基因干擾效果或者后續(xù)功能實(shí)驗(yàn)。注：可在轉(zhuǎn)染12h后補(bǔ)充500 μL完培養(yǎng)基 (含血清)。

siRNA轉(zhuǎn)染試劑推薦

EZ Trans siRNA轉(zhuǎn)染試劑，是一種基于陽離子高分子聚合物開發(fā)的新型轉(zhuǎn)染試劑，適用于siRNA 及microRNA (miRNA) 的轉(zhuǎn)染。本產(chǎn)品能在多種常見細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高效率、低毒性的轉(zhuǎn)染效果，且具有操作簡便，重復(fù)性佳等優(yōu)點(diǎn)，適用于 siRNA或miRNA 介導(dǎo)的基因抑制實(shí)驗(yàn)。