化學發(fā)光免疫分析包含免疫分析系統和化學發(fā)光分析系統
更新時間:2022-07-25 點擊次數:1001
在常溫下由化學反應產生的光,產生電子能級處于激發(fā)態(tài)的物質,后者通過躍遷釋放能量產生光子,從而導至的發(fā)光現象?;瘜W發(fā)光是一個多步驟的過程。
學發(fā)光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay,CLIA)誕生于1977年,是近十年來在世界范圍內發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析,將高靈敏的化學發(fā)光技術與高特異性的免疫反應結合起來建立的微量測定技術,因此該技術靈敏度高、線性范圍寬、應用范圍廣。而且CLIA與放射免疫分析(RIA)、熒光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(EIA)相比,操作簡便、反應快速、無放射污染,儀器簡單穩(wěn)定且可以實現自動化。
化學發(fā)光免疫分析包含免疫分析系統和化學發(fā)光分析系統。
免疫分析系統是指:抗原抗體標記化學發(fā)光物質或酶,經過抗原與抗體反應形成抗原-抗體免疫復合物。
化學發(fā)光分析系統是指在免疫反應結束后,利用化學發(fā)光物質經催化劑的催化和氧化劑的氧化,形成一個激發(fā)態(tài)的中間體,這種激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時,同時發(fā)射出光子,利用發(fā)光信號測量儀進行檢測。根據化學發(fā)光標記物與發(fā)光強度的關系,可利用標準曲線計算出被測物的含量。
ECL化學發(fā)光法是目前常用、靈敏的WesternBlot檢測方法。由于這些底物不會在膜表面沉淀、牢牢結合在膜上,因此可以通過一抗二抗去除液(Strippingbuffer)將親和結合的一抗和二抗去除。一抗二抗去除液既要足夠強烈而有效解離結合的抗體,也要足夠溫和使轉移的目標蛋白仍能完整地留在NC膜或PVDF膜上。通過使用一抗二抗去除液,充分去除一抗二抗,可以非常方便地重新利用使用過的膜檢測其它蛋白。和重新跑一次SDS-PAGE膠相比,不僅省時省力,而且可以消除重新上樣而帶來的誤差,使可比性更強。